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发信人: Purple (◎紫藕轩◎小酌◎), 信区: Campus_Huajiachi
标  题: RFLP技术及其用途
发信站: 浙江大学海纳百川站 (Sun Apr 20 00:07:52 2003)

RFLP技术及其用途是什么?


    BFlP是英文Restriction Fregrmeat Length Po1ymor— Phism的缩写,意思是“限制
性片段长度多态性”。它是随着生物技术若干领域的发展而产生的一种分子标记技术,用
该技术可作出植物的 RFlP图谱,这对于植物遗传和育种研究都有重要的意义。

   分子标记,从本质上说,是以染色体DNA上特定的核苷酸序列作为标记。染色体DNA由四
种核昔酸组成;而这四种核苷酸的不同主要是由于组成核苷酸的碱基不同。所以,如 果将
染色体的DNA纤丝比喻成一条马路,那么这四种核苷酸(或其对应的四种碱基)就是铺成这
条马路的四种花色的石头。一般而言,在马路的任一路段这些石头的排列顺序都会完全一
样,故此这种特异的排列顺序就成了这条马路天然的里程碑,一旦我们将某个性状与该特
异的顺序联系起来, 那么控制该性状的基因就自然被定位于染色体上的这一区段。

    那么植物基因组的尽RFLP分析是如何进行的呢?

    先说一下限制性片段的获得及其长度分析。限制性内切酶是一类具有特殊功能的核酸
切割酶,不同的内切酶可辨认并作用于特异的DNA序列,并在此将 DNA切断,而该序列在染
色体DNA上不只一次地出现,所以,一条完整的DNA 链被酶切后会断成长度不同的多种片段
,统称限制性片段。 这些片段本身都带有一定的电荷,当它们的混合液被点到凝胶板上并
在胶片两例加有电压时,这些片段就会在电场的作用下穿过凝胶的孔隙面移动,我们称之
为电泳。DNA片段 越短越容易穿过这些孔隙,运动速度越快,一段时间之后这 些混合液就
会沿电场方向分成了数个小的集团,最短的片段 在最前面,最长的片段自然留在最后面。
在这种情况不对胶板上的DHA进行染色,便可显示出数条带,与对照样品的带纹相比,也就
知道了各条带处DNA片段的长度,应该指出的 是,大多数作物的基因组都很大,酶切后可
形成多种长度的 DNA片段,电泳后不同长度的片段连成—片,难以区分,这时就需要在这
些片段中再做标记,并通过探针将其显示出 来。所谓探针就是一小段 DNA片段,所不同的
是这—小段 DNA中某一元素被其放射性同位素所取代,常用的同位素是32P。探针的获得最
先用内切酶处理植物的 DNA获得DNA片 段,再将其重组到质粒上,使它能插人细菌寄主细胞
并在里 面进行复制,通过稀释繁殖,每个菌落一般由携带某
一段 DNA的细菌繁殖而来,这种在细菌细胞中扩增、纯化DNA 片段的过程称做DNA克隆,这
—系列的克隆经放射性同位素 标记就成了一系列的探针。作物DNA限制性片段混合液电泳
后再用类似于拓片的方法将这些DNA片段形成的带纹转移到硝酸纤维素滤膜上并以探针溶液
处理,只要其一部位的DNA 片段具有与探针互补的DNA序列,探针的DNA既可与之杂交结合
,就如同同源染色体配对一样,被结合的探针不易再被冲洗淖,随后将感光胶片覆盖在胶
板的表面,在有探针的地方胶片被感光而显示出带纹。很显然,这种带纹的有无和出现的
位置是由探针和内切酶的种类共同决定的。

    再谈一下RFLP图谱的制做。供试材料需要纯合的父母本及一定数量的F2代单株,先提
取双亲和Fz代单株的DNA,可以发现某一内切酶和探针的配合处理可使双亲的带纹表现出多
态性,也就是存在带的有无或位置的差异。

    从图中看出探针a和c可对父本形成标记带纹,而探b只在母本上形成标记带纹。综合这
三个探针的标记可以看出,其F2代中父本类型(同时具有 a和 c带)、双亲重组类型 (同时
具有a、 b、 c三条带)和母本类型(只有b带)的比例大约为 I:2:1。显然, RFLP为共显性
标记,杂合子会同时表现出双亲的带型。仔细比较还可发现,标记a和b或是c和b是独 立分
配的,而标记a和c显然是连锁遗传的,只有个别单株 (第11号株)发生了交换重组,根据其
重组率还可算出此二位 点间的遗传距离。以此类推,如果分别用更多的探针进行标记,可
以积累大量的电泳图谱,经计算机处理,便可以分析出哪些标记是连锁的,遗传距离分别
是多少,据此便可以做出该作物基因组的RFLP图谱。显然, 它可以一次定位大量的标记位点
,与传统的连锁遗传图相比, RFLP图谱不仅制 图效率高,而且可以找到重多的标记位点
,使基因的定位更精确。不过RFLP图谱上大多数的位点还是以探针定名的, 还需要进一步
的研究工作将标记位点与植物的外在性状联系 起来。

    目前,通过 RFLP标记质量性状巳取得了重大进展,科学家已开始研究用它来标记数量
性状。将来有一天我们可以借助于分子标记技术实现对基因型的直接选择和对数量性状基
因的克隆、转移,从而大大地提高作物改良的效率。

http://www.ytinfo.ac.cn/aicwww/wspx/lj/w98.htm

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  花间一壶酒,独酌无相亲。举杯邀明月,对影成三人。


※ 来源:.浙江大学海纳百川站 http://bbs.zju.edu.cn [FROM: Purple]


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